Tách dòng và biểu hiện gen mã hóa cytochrome P450 từ DNA metagenome suối nước nóng Bình Châu

Abstract

Luận văn đã tách chiết thành công DNA metagenome của mẫu nước thu thập suối nước nóng Bình Châu. DNA metagenome được đọc trình tự bằng thiết bị giải trình tự thế hệ mới Illumina, thu được 10.2 Gb dữ liệu thô. Sau khi tiến hành lắp ráp de novo, dự đoán gen và chú giải chức năng thu được 68 khung đọc mở tiềm năng mã hóa enzyme cytochrome P450 trong đó có 38 ORF hoàn chỉnh bao gồm 13 khung đọc mở có nhiệt độ Tm cao hơn 65oC, 23 khung đọc mở có Tm nằm trong khoảng từ 55oC đến 65oC và 2 khung đọc mở có Tm thấp hơn 55oC. Tiến hành phân lập gen tiềm năng mã hóa cytochrome P450 từ DNA metagenome suối nước nóng Bình Châu thu được 1 gen duy nhất có kích thước 1188 bp. Sau khi tách dòng, đọc trình tự bằng Sanger và đối chiếu với cơ sở dữ liệu cytochrome P450 vi khuẩn, gen mã hóa cytochrome P450 thu được từ suối nước nóng Bình Châu được xếp vào nhóm CYP203A1 (tương đồng 94%). Gen mã hóa CYP203A1 được biểu hiện thành công trong chủng vi khuẩn E.Coli C43(DE3) bằng vector biểu hiện pET17b. Gen mã hóa CYP203A1 thu được từ suối nước nóng Bình Châu được xác định giữ được 100% hoạt tính ở 50oC nhưng mất hoàn toàn hoạt tính sau khi ủ ở 60oC trong 15 phút đồng thời nhiệt độ bán rã Tm = 56.8±0.08 (R2=0.99).